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產品名稱：免提取pcr直接擴增試劑盒
產品型號： 400T
產品廠商：通蔚生物
產品價格：552
產品庫存：125
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簡單介紹：

免提取pcr直接擴增試劑盒本產品專用于從各種常見的生物樣品中快速釋放DNA，并進行PCR擴增。

詳情介紹：

免提取pcr直接擴增試劑盒

產品特點

本產品專用于從各種常見的生物樣品中快速釋放DNA，并進行PCR擴增。

它具有下列特點：

1. 操作簡便，用時短，約5-10分鐘即可以得到用于核酸擴增的DNA模板，無需提取純化步驟。

2. PCR擴增試劑包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR反應增強劑、優化劑以及穩定劑，濃度為2×。具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、穩定性好等優點。

3.可以用于幾乎所有的生物樣品包括細-菌、昆蟲、真-菌、各種植物、各種動物、法醫樣品（包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛發、組織樣品、口腔細胞和FTA卡）石蠟組織切片等。

4. 在 PCR 結束后可以直接上樣電泳。

5. 不含任何有毒有害的試劑。

6. 本產品可處理 400 份樣品，進行 400 次 20μl 的 PCR 擴增。

成分規格

組成	名稱	規格
組分一	核酸釋放劑	20ml
組分二	2×PCR MasterMix	4×1ml
核酸釋放劑可常溫放置，2×PCR MasterMix 需要在-20℃保存，有效期12個月
本產品僅供科研使用，不得用于其它用途

使用方法

(一）DNA釋放－液體樣品

1. 將約 2 μL 液體樣品（如全血、細胞培養液、病毒樣品、糞便樣品）加入到50μL核酸釋放劑中。

注意：總液體樣品用量不要超過本產品用量的1/10

2. 室溫放置3分鐘；對于較難裂解的樣品（如有厚壁的真-菌等），則保溫時間可以延長到 10-30分鐘。

3. 簡短振蕩混勻后取樣品裂解液直接進行PCR擴增。

組織樣品

1. 將 2 mg 左右的固體樣品（如動物組織、植物葉片、種子等）加入到50 μL核酸釋放劑中。

注意：總樣品量不要超過 1 mg/10μL的比例。

2. 95℃加熱 5 分鐘；對于較難裂解的樣品（如石蠟組織切片、血斑等），則保溫時間可以延長到 10-30 分鐘。

3. 簡短振蕩混勻后取樣品裂解液直接進行 PCR 擴增。

(二）PCR 擴增

注意：以下舉例為常規PCR體系和反應條件，實際操作中應根據模板、引物結構和目的片段大小不同進行相應的調整和優化）

1. PCR體系推薦反應體系（20μl）

注意：

裂解液體積不要超過反應體積的 1/10，對 20μL 的擴增體系，加入的裂解液不要超過2μL。引物濃度請以終濃度 0.1 - 1.0 uM 作為設定范圍的參考。擴增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發生非特異性反應時，可降低引物濃度，由此優化反應體系。

試劑

用量

樣品裂解液

< 2 μl

Primer F (10μM)

0.5μl

Primer R (10μM)

0.5μl

2×PCR MasterMix

10μl

ddH2O

Up to 20μl

2. PCR 程序

過程

溫度

時間

預變性

94℃

2min

25-35cycles

變性

94℃

30sec

退火

55-65℃

30sec

延伸

72℃

1kb/30sec

終延伸

72℃

2min

注意：

A. 一般實驗中退火溫度比擴增引物的熔解溫度 Tm 低 5℃，無法得到理想的擴增效率時，適當降低退火溫度；發生非特異性反應時，提高退火溫度，由此優化反應條件。

B. 延伸時間應根據所擴增片段大小設定，Taq DNA Polymerase 的擴增效率為1kb/30 sec。

C. 可根據擴增產物的下游應用設定循環數。如果循環次數太少，擴增量不足；如果循環次數太多，錯配機率會增加，非特異性背景嚴重。所以，在保證產物得率的前提下，應盡量減少循環次數

3. 結果檢測

反應結束后取5 μl反應產物，然后進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。

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您的需求：

試劑	用量
樣品裂解液	< 2 μl
Primer F (10μM)	0.5μl
Primer R (10μM)	0.5μl
2×PCR MasterMix	10μl
ddH2O	Up to 20μl

過程		溫度	時間
預變性		94℃	2min
25-35cycles	變性	94℃	30sec
	退火	55-65℃	30sec
	延伸	72℃	1kb/30sec
終延伸		72℃	2min

產品名稱：免提取pcr直接擴增試劑盒