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產(chǎn)品中心

產(chǎn)品詳情

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產(chǎn)品名稱：快速高保真DNA聚合酶(野生型)
產(chǎn)品型號(hào)： 500 U,2.5 U/ul
產(chǎn)品廠商：通蔚生物
產(chǎn)品價(jià)格：1265
產(chǎn)品庫(kù)存：123
產(chǎn)品文檔：

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簡(jiǎn)單介紹：

快速高保真DNA聚合酶(野生型)快速高保真 DNA 聚合酶（野生型）是從克隆有 Pfu DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后分離純化的，該酶融合了 sso7d 序列，該酶在保證高保真性前提下，大大增強(qiáng)擴(kuò)增的速度。在 PCR 反應(yīng)中，該酶延伸速度為 1 kb/10-15s，較適合小于2kb以下片段的擴(kuò)增，具有 5’-3’DNA 聚合酶活性和 3’-5’外切核酸酶活性，產(chǎn)物3’端不帶A，不能直接用 TA 載體克隆。一般用于 DNA 片段的 PCR 擴(kuò)增、DNA 標(biāo)記、引物延伸、序列測(cè)定等，產(chǎn)物不能直接用于 T/A 載體克隆。

詳情介紹：

快速高保真DNA聚合酶(野生型)

產(chǎn)品特點(diǎn)

快速高保真 DNA 聚合酶（野生型）是從克隆有 Pfu DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后分離純化的，該酶融合了 sso7d 序列，該酶在保證高保真性前提下，大大增強(qiáng)擴(kuò)增的速度。在 PCR 反應(yīng)中，該酶延伸速度為 1 kb/10-15s，較適合小于2kb以下片段的擴(kuò)增，具有 5’-3’DNA 聚合酶活性和 3’-5’外切核酸酶活性，產(chǎn)物3’端不帶A，不能直接用 TA 載體克隆。一般用于 DNA 片段的 PCR 擴(kuò)增、DNA 標(biāo)記、引物延伸、序列測(cè)定等，產(chǎn)物不能直接用于 T/A 載體克隆。

成分規(guī)格

產(chǎn)品組成	規(guī)格
快速高保真 DNA 聚合酶(野生型)	200μl / 500Ｕ/ 2.5U/μl
10×快速高保真 Buffer	2×1ml
-20℃，有效期 1 年
本產(chǎn)品僅供科研使用　，不得用于其它用途

使用方法

注意：以下舉例為常規(guī)PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整和優(yōu)化）

1. PCR 體系：

推薦體系（50μl）

試劑	用量
模板 DNA	< 1μg
10×快速高保真Buffer	5μl
dNTP Mixture(2.5 mM each)	4μl
Primer 1 (10 μM)	2μl
Primer 2 (10 μM)	2μl
快速高保真 DNA 聚合酶（野生型）	0.5 ~ 1μl
ddH2O	Up to 50μl

2. PCR 程序

過程		溫度	時(shí)間
預(yù)變性		94℃	5min
25－35cycles	變性	94℃	30sec
	退火	55－65℃	30sec
	延伸	72℃	1kb/15sec
	終延伸	72℃	5min

注意：

a 一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引物的熔解溫度 Tm 相當(dāng)，無法得到理想的擴(kuò)增效率時(shí)，適當(dāng)降低退火溫度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，提高退火溫度，由此優(yōu)化反應(yīng)條件。

3. 結(jié)果檢測(cè)：

反應(yīng)結(jié)束后取 5 μl 反應(yīng)產(chǎn)物，加入適量上樣緩沖液后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

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