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產(chǎn)品中心

產(chǎn)品詳情

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產(chǎn)品名稱：Taq DNA Polymerase(含預(yù)混Mg2 +的10×Taq Buffer)
產(chǎn)品型號： 500 U, 2.5 U/ul
產(chǎn)品廠商：通蔚生物
產(chǎn)品價格：201
產(chǎn)品庫存：119
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簡單介紹：

Taq DNA Polymerase是從克隆有Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后分離純化的，其分子量為 94 KD。Taq DNA Polymerase 具有5-3’DNA聚合酶活性和 5-3’外切核酸酶活性，無 3-5’外切酶活性。在 PCR 反應(yīng)中，Taq DNAPolymerase延伸速度為 1-2 kb/分鐘，產(chǎn)物 3’端帶 A，可直接用 TA 載體克隆。

詳情介紹：

Taq DNA Polymerase(含預(yù)混Mg2 +的10×Taq Buffer)
產(chǎn)品特點
Taq DNA Polymerase是從克隆有Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后分離純化的，其分子量為 94 KD。Taq DNA Polymerase 具有5-3’DNA聚合酶活性和 5-3’外切核酸酶活性，無 3-5’外切酶活性。在 PCR 反應(yīng)中，Taq DNAPolymerase延伸速度為 1-2 kb/分鐘，產(chǎn)物 3’端帶 A，可直接用 TA 載體克隆。

成分規(guī)格

產(chǎn)品組成	規(guī)格
Taq DNA Polymerase	250Ｕ/ 2.5U/μl
10 × Taq Buffer（含 Mg2+）	1m / 2*1 ml
-20℃，有效期 1 年
本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于其它用途

使用方法

（注意：以下舉例為常規(guī)PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，實際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整和優(yōu)化）

1. PCR 體系：

推薦體系（50 μl）

試劑	用量
模板 DNA	< 1μg
10 × Taq PCR Buffer	5μl
dNTP Mixture(2.5 mM each)	4μl
Primer 1 (10 μM)	2μl
Primer 2 (10 μM)	2μl
Taq DNA Polymerase (2.5 U/μl)	0.5 ~ 1μl
ddH2O	Up to 50μl

注意：

A 引物濃度請以終濃度 0.1-1.0μM 作為設(shè)定范圍的參考。擴(kuò)增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。

B 鎂離子濃度請以終濃度 1.5-3mM 作為設(shè)定范圍的參考。可根據(jù)不同的引物對和模板來調(diào)節(jié)鎂離子濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系）

2. PCR 程序

過程		溫度	時間
預(yù)變性		94℃	5min
25－35cycles	變性	94℃	30sec
	退火	55－65℃	30sec
	延伸	72℃	1kb/30sec
	終延伸	72℃	5min

注意：

a 一般實驗中退火溫度比擴(kuò)增引物的熔解溫度 Tm 低 5℃，無法得到理想的擴(kuò)增效率時，適當(dāng)降低退火溫度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時，提高退火溫度，由此優(yōu)化反應(yīng)條件。

b 延伸時間應(yīng)根據(jù)所擴(kuò)增片段大小設(shè)定，Taq DNA Polymerase 的擴(kuò)增效率為 1 kb/30 sec。

C 可根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的下游應(yīng)用設(shè)定循環(huán)數(shù)。如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，錯配機(jī)率會增加，非特異性背景重。所以，在保證產(chǎn)物得率的前提下，應(yīng)盡量減少循環(huán)次數(shù)）

3. 結(jié)果檢測：

反應(yīng)結(jié)束后取 5 μl 反應(yīng)產(chǎn)物，加入適量上樣緩沖液后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測。

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