文章詳情
ELISA實驗中檢測抗原的方法
日期：2025-08-01 16:34
瀏覽次數(shù)：554
摘要：1、ELISA試劑盒雙抗體夾心法
針對至少2個抗原決議簇的多價抗原。首要介紹一下抗原決議簇，抗原決議簇便是決議抗原性的特殊化學基團，也叫抗原表位，理論上一個抗原決議簇能誘導產(chǎn)生一種單克隆抗體。由6－12氨基酸或碳水基團組成，它可以是由接連序列（線性表位）組成或由不接連的蛋白質三維結構（構象表位）組成。臨床上具有2個抗原決議簇的多價抗原有很多，比較常見有HBSAG、AFP、HCG等大分子抗原。檢測進程也簡略，便是包被、洗刷、加樣、洗刷、加樣、洗刷、顯色。具體說來是先將純化的相應抗體包被在固相載體上，再參加待測樣品，若...
1、ELISA試劑盒雙抗體夾心法
針對至少2個抗原決議簇的多價抗原。首要介紹一下抗原決議簇，抗原決議簇便是決議抗原性的特殊化學基團，也叫抗原表位，理論上一個抗原決議簇能誘導產(chǎn)生一種單克隆抗體。由6－12氨基酸或碳水基團組成，它可以是由接連序列（線性表位）組成或由不接連的蛋白質三維結構（構象表位）組成。臨床上具有2個抗原決議簇的多價抗原有很多，比較常見有HBSAG、AFP、HCG等大分子抗原。檢測進程也簡略，便是包被、洗刷、加樣、洗刷、加樣、洗刷、顯色。具體說來是先將純化的相應抗體包被在固相載體上，再參加待測樣品，若其中含有待測抗原就會與固相抗體結合，洗掉雜質后，再參加酶符號的檢測抗體進行反響，洗掉多于的酶標抗體后，參加底物顯色，顯色與否以及顏色的深淺就代表了待測抗原是否存在以及相對含量。
（2）假如檢測的樣本是血清，就要留意風濕病患者體內內風濕因子RF這種奇葩異種抗體的存在，它可以結合固相抗體和檢測抗體，形成假陽性的不佳成果。
（3）包被的固相抗體含量一定是高于樣品中的抗原含量，否則檢測到的含量會比實踐含量低。
（4）假如想優(yōu)異省事一些，將待測樣品與酶標檢測抗體一起參加固相載體，在酶標檢測抗體高于樣品中的待測抗原的情況下呈現(xiàn)假陰性成果，這種現(xiàn)象書本叫鉤狀效應。
2、ELISA試劑盒競爭法
針對小分子抗原。這種辦法也可以用于大分子抗原，僅僅相對雙抗夾心法這種強悍的策略，競爭法完全沒有優(yōu)勢，所以競爭法只在檢測小分子這個邊際地帶發(fā)揮余熱了。臨床上首要用于T3、T4、孕酮等激su以及藥wu等。檢測進程與雙抗夾心法更簡略，包被、洗刷、加樣、洗刷、顯色，少了一步加樣的進程，可是規(guī)劃上復雜一些，首要將純化的相應抗體包被在固相載體上，然后每組樣本需求分兩組，一組一起參加事前混勻好的酶標檢測抗原和樣本的混合物，一組只參加酶符號抗原，兩組顏色差便是待測抗原的含量。
關于競爭法也需求留意一點，酶符號抗原和待測樣本一定要事前混勻好，然后一起參加固相載體，否則會形成不公平競爭，檢測呈現(xiàn)誤差。
針對至少2個抗原決議簇的多價抗原。首要介紹一下抗原決議簇，抗原決議簇便是決議抗原性的特殊化學基團，也叫抗原表位，理論上一個抗原決議簇能誘導產(chǎn)生一種單克隆抗體。由6－12氨基酸或碳水基團組成，它可以是由接連序列（線性表位）組成或由不接連的蛋白質三維結構（構象表位）組成。臨床上具有2個抗原決議簇的多價抗原有很多，比較常見有HBSAG、AFP、HCG等大分子抗原。檢測進程也簡略，便是包被、洗刷、加樣、洗刷、加樣、洗刷、顯色。具體說來是先將純化的相應抗體包被在固相載體上，再參加待測樣品，若其中含有待測抗原就會與固相抗體結合，洗掉雜質后，再參加酶符號的檢測抗體進行反響，洗掉多于的酶標抗體后，參加底物顯色，顯色與否以及顏色的深淺就代表了待測抗原是否存在以及相對含量。
關于雙抗體夾心法檢測大分子抗原要留意幾點：
（1）固相抗體和酶標檢測抗體一定是別離針對待測抗原的兩個不同抗原決議簇，否則兩個抗體就會為爭同一個決議簇而打架，會呈現(xiàn)假陰性的不佳成果。（2）假如檢測的樣本是血清，就要留意風濕病患者體內內風濕因子RF這種奇葩異種抗體的存在，它可以結合固相抗體和檢測抗體，形成假陽性的不佳成果。
（3）包被的固相抗體含量一定是高于樣品中的抗原含量，否則檢測到的含量會比實踐含量低。
（4）假如想優(yōu)異省事一些，將待測樣品與酶標檢測抗體一起參加固相載體，在酶標檢測抗體高于樣品中的待測抗原的情況下呈現(xiàn)假陰性成果，這種現(xiàn)象書本叫鉤狀效應。
2、ELISA試劑盒競爭法
針對小分子抗原。這種辦法也可以用于大分子抗原，僅僅相對雙抗夾心法這種強悍的策略，競爭法完全沒有優(yōu)勢，所以競爭法只在檢測小分子這個邊際地帶發(fā)揮余熱了。臨床上首要用于T3、T4、孕酮等激su以及藥wu等。檢測進程與雙抗夾心法更簡略，包被、洗刷、加樣、洗刷、顯色，少了一步加樣的進程，可是規(guī)劃上復雜一些，首要將純化的相應抗體包被在固相載體上，然后每組樣本需求分兩組，一組一起參加事前混勻好的酶標檢測抗原和樣本的混合物，一組只參加酶符號抗原，兩組顏色差便是待測抗原的含量。
關于競爭法也需求留意一點，酶符號抗原和待測樣本一定要事前混勻好，然后一起參加固相載體，否則會形成不公平競爭，檢測呈現(xiàn)誤差。